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點擊次數：15196 發布時間：2013/3/29 11:32:29
1. 細胞培養（HEK293T）
1） 顯微鏡下觀察細胞，細胞生長狀態良好，去上清；
2） 加入預熱的PBS 3ml, 溫柔地清洗細胞,棄去PBS；
3） 用胰蛋白酶消化細胞，通常75cm2 培養瓶的貼壁細胞用3ml 胰蛋白酶于37oC
處理5min；
4） 待細胞脫落后，加入5ml DMEM 培養液（含10%FBS）以終止消化反應，并將
細胞懸液轉移入15ml 或50ml 離心管中；
5） 1000rpm 離心5min，去除上清；
6） 加入10ml DMEM 培養液（含10%FBS），重新懸浮細胞，使細胞充分打散；
7） 進行細胞計數,（4 個大方格細胞數的均值×104 個為每ml 所含細胞數）；
8） 根據細胞計數結果，將適當數量的細胞懸液轉接入含有新鮮培養液的培養瓶
或皿中；（第二天做轉染，A.Fugene6 法－－細胞總量應達4-5×106 /10cm 培養
皿; B. 磷酸鈣法: 細胞總量應達3×106 / 10cm 培養皿）；
9） 置于37 ℃ 5％CO2 的培養箱中培養 （注意培養箱應有足夠的水分）。
注：以上所使用的胰蛋白酶、培養液等在使用前都置于37℃水浴中預熱，以減
小對細胞的刺激。
2. 細胞轉染
2.1 脂質體介導的貼壁細胞轉染法
以下針對293T 細胞、10cm 培養皿
目前主要使用試劑盒為Roche 公司的FuGENETM6 Transfection Reagent
1） 轉染前24 小時以4-5×106 /10cm 培養皿的細胞總量鋪板，當細胞生長狀態
原創作者：上海恒遠生物技術發展有限公司
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