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點擊次數：16030 發布時間：2012/1/31 10:14:27
人雌二醇（E2）ELISA試劑盒實驗原理
本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中人雌二醇（E2）水平。用純化的人雌二醇（E2）抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入雌二醇（E2），再與HRP標記的雌二醇（E2）抗體結合，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，經過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成*終的黃色。顏色的深淺和樣品中的雌二醇（E2）呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標準曲線計算樣品中人雌二醇（E2）濃度。
人雌二醇（E2）ELISA試劑盒操作步驟
1. 標準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標準品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。
80 pmol/L 5號標準品 150μl的原倍標準品加入150μl標準品稀釋液
40 pmol/L 4號標準品 150μl的5號標準品加入150μl標準品稀釋液
20 pmol/L 3號標準品 150μl的4號標準品加入150μl標準品稀釋液
10 pmol/L 2號標準品 150μl的3號標準品加入150μl標準品稀釋液
5 pmol/L 1號標準品 150μl的2號標準品加入150μl標準品稀釋液
2. 加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品*終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。
3. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
4. 配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復5次，拍干。
6. 加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。
7. 溫育：操作同3。
8. 洗滌：操作同5。
9. 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.
10. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。
11. 測定：以空白空調零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應在加終止液后15分鐘以內進行。
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原創作者：上海恒遠生物技術發展有限公司
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